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植物查爾酮異構(gòu)酶(CHI)ELISA試劑盒性能

更新時間:2017-09-05      瀏覽次數(shù):1144

本試劑盒用于體外定量檢測組織、細胞及相關(guān)液體樣本植物查爾酮異構(gòu)酶CHI)的活性。

有效期:6個月

保存條件:2-8℃

實驗原理

試劑盒采用雙抗體一步夾心法酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA)。往預(yù)先包植物查爾酮異構(gòu)酶CHI)捕獲抗體的包被微孔中,依次加入標本、標準品、HRP標記的檢測抗體,經(jīng)過溫育并*洗滌。用底物TMB顯色,TMB在過氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍色,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中的植物查爾酮異構(gòu)酶CHI)呈正相關(guān)。用酶標儀在450nm 波長下測定吸光度(OD 值),計算樣品濃度。

操作步驟

  1.   從室溫平衡20min后的鋁箔袋中取出所需板條,剩余板條用自封袋密封放回4℃。
  2.   設(shè)置標準品孔和樣本孔,標準品孔各加不同濃度的標準品50μL;
  3.   樣本孔待測樣本50μL;空白孔不加。
  4.   除空白孔外,標準品孔和樣本孔中每孔加入辣根過氧化物酶(HRP)標記的檢測抗體100μL,用封板膜封住反應(yīng)孔,37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60min。
  5.   棄去液體,吸水紙上拍干,每孔加滿洗滌液(350μL,靜置1min,甩去洗滌液,吸水紙上拍干,如此重復(fù)洗板5次(也可用洗板機洗板)。
  6.   每孔加入底物A、B各50μL,37℃避光孵育15min。
  7.   每孔加入終止液50μL,15min內(nèi),在450nm波長處測定各孔的OD值。

 

實驗結(jié)果計算

所測標準品的OD值為橫坐標,標準品的濃度值為縱坐標,在坐標紙上或用相關(guān)軟件繪制標準曲線,并得到直線回歸方程將樣品的OD值代入方程,計算出樣品濃度

 

試劑盒性能

  •  檢測范圍10 U/ml  320 U/ml。
  •  靈敏度:zui低檢測濃度小于1.0 U/ml
  •  特異性:不與其它可溶性結(jié)構(gòu)類似物交叉反應(yīng)。
  •  重復(fù)性:板內(nèi)變異系數(shù)小于10% ,板間變異系數(shù)小于15% 。
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