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上海仁捷生物-ELISA(雙抗體夾心法)檢測(cè)HBsAg

更新時(shí)間:2017-06-22      瀏覽次數(shù):1541

ELISA實(shí)驗(yàn)技巧:ELISA(雙抗體夾心法)檢測(cè)HBsAg

以已知抗體(抗HBs)包被載體,然后將含有抗原的待檢標(biāo)本加入,共同孵育后,抗原結(jié)合于包被抗體上,再加入酶標(biāo)記特異抗體(酶標(biāo)抗HBs),酶標(biāo)抗體連接到抗原上,zui后加入底物溶液,根據(jù)顏色反應(yīng)來(lái)判定抗原含量。
ELISA(雙抗體夾心法)檢測(cè)HBsAg
【材料】HBsAg試劑盒,本試劑盒含:
1、包被抗-HBs反應(yīng)條
1瓶
2、酶結(jié)合物
1瓶
3、HBSAg陽(yáng)性對(duì)照
1瓶
4、HBsAg陰性對(duì)照
1瓶
5、洗滌液:用前每瓶作1:20稀釋
1瓶
6、顯色劑(TMB)A
1瓶
7、顯色劑(TMB)B
1瓶
8、終止液
1瓶

【方法】

1、加入待測(cè)標(biāo)本每孔0.05ml,并設(shè)HBsAg陽(yáng)性對(duì)照2孔,HBsAg陰性對(duì)照2孔,空白對(duì)照1孔,然后加入酶結(jié)合物每孔1滴(0.05ml、空白對(duì)照孔不加),充分混勻后置37℃孵育30分鐘。
2、洗板:棄去反應(yīng)條孔內(nèi)液體、拍干、用洗滌液注滿(mǎn)每孔,棄去拍干,反復(fù)五次后拍干。
3、顯色劑:先加顯色劑A每孔1滴(0.05ml),然后再加顯色劑B每孔1滴(0.05ml),混勻,37℃孵育10分鐘。
4、每孔加終止液1滴(0.05ml),混勻。

【結(jié)果】

比色法:波長(zhǎng)450nm,先用空白孔校零點(diǎn),然后讀取各孔光密度值。
樣品OD值/陰性對(duì)照平均OD值≥ 2.1判斷為陽(yáng)性,否則為陰性。
備注:陰性對(duì)照平均OD值低于0.05作0.05計(jì)算,高于0.05按實(shí)際OD值計(jì)算。陽(yáng)性對(duì)照OD值≥0.8,實(shí)驗(yàn)結(jié)果有效。

【注意事項(xiàng)】
1、試劑盒置2℃~8℃保存。
2、使用前試劑應(yīng)搖勻,并棄去1~2滴后垂直滴加。
3、從冷藏環(huán)境中取出試劑盒內(nèi)全部瓶裝試劑及待測(cè)標(biāo)本所需微孔條,置室溫平衡30分鐘后再行測(cè)試,余者應(yīng)及時(shí)封存于冰箱中以備后用。
4、待測(cè)標(biāo)本不可用NaN3防腐。
5、不同批號(hào)試劑請(qǐng)勿通用。
6、結(jié)果判斷須在10分鐘內(nèi)完成。
7、若濃縮洗滌液出現(xiàn)結(jié)晶時(shí),請(qǐng)置37℃至溶解。

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