今天小編給大家講講ELISA實(shí)驗(yàn)中關(guān)于跳孔的疑問(wèn)及解決方法:
問(wèn):我剛配置試劑的時(shí)候中斷了,這是否會(huì)影響我的實(shí)驗(yàn)結(jié)果?
答:這可能會(huì)導(dǎo)致產(chǎn)生波動(dòng)的曲線。在移液之前確定所有的標(biāo)準(zhǔn)品或者樣品是否配制完好。請(qǐng)?jiān)谠噭┡渲仆甑?5-20分鐘內(nèi)滴加入板內(nèi)。(除非特別說(shuō)明)
問(wèn):我是否需要一個(gè)多道移液器?
答:在配制諸如底物,酶結(jié)合物,或者稀釋液的時(shí)候,最好選擇連續(xù)或多道移液器。
問(wèn):如果我沒(méi)有平衡試劑會(huì)怎樣?
答:沒(méi)有平衡的試劑會(huì)導(dǎo)致孔之間溫度不均,使整個(gè)酶標(biāo)板的信號(hào)產(chǎn)生變異。除非特別說(shuō)明,試劑一般在使用之前都要平衡至室溫。
每次檢測(cè)都會(huì)有推薦的孵育時(shí)間和溫度。冷凍的試劑一般需要更長(zhǎng)的孵育、間。所以最好使用說(shuō)明書上推薦的孵育溫度和時(shí)間。
問(wèn):我是否需要蓋板?
答:參看試劑盒內(nèi)說(shuō)明書。如果說(shuō)明書內(nèi)的實(shí)驗(yàn)步驟中有推薦使用蓋板,則在使用時(shí)應(yīng)選用與酶標(biāo)板配套的蓋板,使邊緣與酶標(biāo)板緊密契合。如果蓋板的一邊突起,則會(huì)產(chǎn)生信號(hào)的差別。
問(wèn):酶標(biāo)儀的設(shè)置怎樣影響我的結(jié)果?
答:對(duì)于底物測(cè)定,如果讀數(shù)時(shí)間等于或超過(guò)2秒/孔,使從第一孔到最后一孔在讀書時(shí)存在時(shí)間上的延誤,會(huì)導(dǎo)致結(jié)果的異變。在底物反應(yīng)階段,辣根過(guò)氧化物酶會(huì)一直作用直到底物反應(yīng)*。而由于時(shí)間的延誤,底物越來(lái)越少,底物反應(yīng)也受到影響。將酶標(biāo)儀的讀數(shù)時(shí)間設(shè)定為1.0秒/孔。
問(wèn):我是否可以根據(jù)自己的方案來(lái)調(diào)整孵育時(shí)間?
答:更改孵育時(shí)間或溫度會(huì)導(dǎo)致檢測(cè)不能達(dá)到平衡或過(guò)度反應(yīng)。請(qǐng)按照說(shuō)明書推薦的孵育時(shí)間和溫度操作。如果同時(shí)進(jìn)行多項(xiàng)檢測(cè),對(duì)每孔必需分別計(jì)時(shí)已避免孵育不足或過(guò)度孵育。