羧酸酯酶（CarE）測(cè)試盒-實(shí)驗(yàn)原理

羧酸酯酶（CarE）測(cè)試盒-實(shí)驗(yàn)原理

測(cè)定意義：哺乳動(dòng)物CarE，也稱脂族酯酶（aliesterase），廣泛分布于組織和器官，屬于絲氨酸水解酶家族。CarE催化含酯鍵、酰胺鍵和硫酯鍵的內(nèi)源性與外源性物質(zhì)水解，但不能催化水解乙酰膽堿及其類似物。CarE參與脂質(zhì)運(yùn)輸和代謝，并且與多種藥物、環(huán)境毒物以及致癌物的解毒和代謝有關(guān)，有機(jī)磷農(nóng)藥可結(jié)合并且抑制CarE活性。

測(cè)定原理：CarE能催化乙酸-1-萘酯生成萘酯，固籃顯色；在450 nm光吸收增加速率，計(jì)算CarE活性。

需要的儀器，耗材:紫外分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、微量玻璃比色皿/96孔板、低溫離心機(jī)、水浴鍋、可調(diào)式移液槍和蒸餾水。

樣本處理

細(xì)菌或培養(yǎng)細(xì)胞：先收集細(xì)菌或細(xì)胞到離心管內(nèi)，離心后棄上清；按照每200萬(wàn)細(xì)菌或細(xì)胞加入400μL提取液， 超聲波破碎細(xì)胞（功率20%，超聲3s，間隔10s，重復(fù)30次）；然后15000rpm，4℃，離心10min，取上清（若上清 不夠澄清，建議重復(fù)上述離心步驟），置于冰上待檢。

組織：按照組織質(zhì)量（g）: 提取液體積(mL)為1 : 5~10的比例（建議稱取約0.1g組織，加入1mL提取液），進(jìn) 行冰浴勻漿。15000rpm，4℃，離心10min，取上清（若上清不夠澄清，建議重復(fù)上述離心步驟），置于冰上待檢。