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大鼠胰島素(INS)酶聯(lián)免疫分析(ELISA)定量試劑盒

更新時間:2018-06-04      瀏覽次數(shù):1246

大鼠胰島素(INS)酶聯(lián)免疫分析(ELISA)定量試劑盒

本試劑僅供研究使用       目的:本試劑盒用于測定大鼠血清、血漿、組織勻漿、細胞培養(yǎng)物上清及相關(guān)液體樣本中胰島素(INS)的含量。

 

實驗原理

本試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測定標本大鼠胰島素(INS)水平。用純化的大鼠胰島素(INS)捕獲抗體包被微孔板,制成固相體,往包被的微孔中依次加入大鼠胰島素(INS),再與HRP標記的檢測抗體結(jié)合,形成抗體-抗原-酶標抗體復合物,經(jīng)過*洗滌后底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍色,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中的大鼠胰島素(INS)呈正相關(guān)。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度(OD值),通過標準曲線計算樣品大鼠胰島素(INS)含量。

 

試劑盒組成

試劑盒組成

48孔配置

96孔配置

保存

說明書

1份

1份

 

封板膜

2片

2片

 

密封袋

1個

1個

 

酶標包被板

1×48

1×96

2-8℃保存

標準品

0.3ml×6管

0.3ml×6管

2-8℃保存

酶標試劑

5 ml×1瓶

10 ml×1瓶

2-8℃保存

樣品稀釋液

3 ml×1瓶

6 ml×1瓶

2-8℃保存

顯色劑A液

3 ml×1瓶

6 ml×1瓶

2-8℃保存

顯色劑B液

3 ml×1瓶

6 ml×1瓶

2-8℃保存

終止液

3 ml×1瓶

6 ml×1瓶

2-8℃保存

20×濃縮洗滌液

15ml×1瓶

25ml×1瓶

2-8℃保存

注:標準品濃度依次為:48、24、12、6、3、0 mU/L.

操作步驟

  1. 標準品的加樣:設(shè)置標準品孔和樣本孔,標準品孔各加不同濃度的標準品50μL;
  2. 加樣:分別設(shè)空白孔(空白對照孔不加樣品及酶標試劑,其余各步操作相同)、待測樣品孔。在酶標包被板上待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl,然后再加待測樣品10μl(樣品zui終稀釋度為5倍)。加樣將樣品加于酶標板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻
  3. 加酶:每孔加入酶標試劑100μl,空白孔除外
  4. 溫育:用封板膜封板后置37℃溫育60分鐘。
  5. 配液:將20倍濃縮洗滌液用蒸餾水20倍稀釋后備用。
  6. 洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置30秒后棄去,如此重復5次,拍干。
  7. 顯色:每孔先加入顯色劑A50μl,再加入顯色劑B50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色15分鐘.
  8. 終止:每孔加終止液50μl,終止反應(yīng)(此時藍色立轉(zhuǎn)黃色)。
  9. 測定:以空白孔調(diào)零,450nm波長依序測量各孔的吸光度(OD值)。 測定應(yīng)在加終止液后15分鐘以內(nèi)進行。

 

注意事項:

  1. 試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡15-30分鐘后方可使用,酶標包被板開封后如未用完,板條應(yīng)裝入密封袋中保存。
  2. 濃洗滌液可能會有結(jié)晶析出,稀釋時可在水浴中加溫助溶,洗滌時不影響結(jié)果。
  3. 各步加樣均應(yīng)使用加樣器,并經(jīng)常校對其準確性,以避免試驗誤差。一次加樣時間控制在5分鐘內(nèi),如標本數(shù)量多,推薦使用排槍加樣。
  4. 請每次測定的同時做標準曲線,做復孔。如標本中待測物質(zhì)含量過高(樣本OD值大于標準品孔*孔的OD值),請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)(n倍)后再測定,計算時請zui后乘以總稀釋倍數(shù)(×n×5)。
  5. 封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。
  6. 底物請避光保存。
  7. 嚴格按照說明書的操作進行,試驗結(jié)果判定必須以酶標儀讀數(shù)為準.
  8. 所有樣品,洗滌液和各種廢棄物都應(yīng)按傳染物處理。
  9. 本試劑不同批號組分不得混用。

10. 如與英文說明書有異,以英文說明書為準。

 

 

 

計算

以標準物的濃度為橫坐標,OD值為縱坐標,   

在坐標紙上繪出標準曲線,根據(jù)樣品的OD     

值由標準曲線查出相應(yīng)的濃度;再乘以稀釋      

倍數(shù);或用標準物的濃度與OD值計算出標     

準曲線的直線回歸方程式,將樣品的OD值     

代入方程式,計算出樣品濃度,再乘以稀釋      

倍數(shù),即為樣品的實際濃度。                 

 

                                             

 

(此圖僅供參考)

 

 

 

試劑盒性能:

1.樣品線性回歸與預期濃度相關(guān)系數(shù)R值為0.95以上。

2.批內(nèi)變異系數(shù)與批間變異系數(shù)應(yīng)分別小于10%和15% 。

 

檢測范圍:                                              

1.5 mU/L - 48 mU/L

 

靈敏度:                                              

zui低檢測濃度小于0.1 mU/L

 

保存條件及有效期:

1.試劑盒保存: 2-8

2.有效期: 6個月

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郵箱:2450868877@qq.com

傳真:86-區(qū)號-傳真號碼

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