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小鼠抗人乙肝表面抗體(HBsAb) ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)操作

更新時(shí)間:2017-09-06      瀏覽次數(shù):1315

僅供科研使用,不得用于臨床檢驗(yàn)。

 

小鼠抗人乙肝表面抗體(HBsAb)定性檢測試劑盒(ELISA)

說明書

 

【產(chǎn)品名稱】

通用名稱:小鼠抗人乙肝表面抗體(HBsAb)定性檢測試劑盒(ELISA)

英文名稱:Mouse anti-hepatitis B virus surface antibodyHBsAb) ELISA KIT

 

【包裝規(guī)格】

96人份/盒

 

【預(yù)期用途】

僅供科研使用,定性檢測血清、血漿中小鼠抗人乙肝表面抗體(HBsAb)。

 

 

【檢驗(yàn)原理】

試劑盒采用雙抗體夾心法酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)。往預(yù)先包被人乙肝表面抗原(HBsAg)的包被微孔中,依次加入標(biāo)本、陰性和陽性對照、HRP標(biāo)記的檢測抗體,經(jīng)過溫育并*洗滌。用底物TMB顯色,TMB在過氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中的小鼠抗人乙肝表面抗體(HBsAb)呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm 波長下測定吸光度(OD 值),判定陰陽性。

 

 

 

 

 

 

 

【主要組成成分】

主要成分

組分

數(shù)量

主要成分

陰性對照

1.0 ml×1

 

陽性對照

1.0 ml×1

 

包被微孔板

96T

預(yù)包被固相抗原

HRP標(biāo)記抗體

6mL

HRP標(biāo)記的檢測抗體

樣本稀釋液

6mL

 

底物液A

6mL

過氧化脲工作液

底物液B

6mL

TMB工作液

20×濃縮洗滌液

30mL

含0.15%Tween20的PBS

說明書

1份

--

自封袋

1個(gè)

--

不干膠

2片

--

 

需要但未提供的材料及耗材

  1、酶標(biāo)儀

2、精密移液器及一次性吸頭

3、蒸餾水

4、洗瓶或者自動洗板機(jī)

5、37℃水浴鍋或恒溫箱

6、500ml量筒

7、無粉一次性乳膠手套

 

【儲存條件及有效期】

  1、2-8保存,切勿冷凍,有效期6個(gè)月。

  2、開封使用后,包被微孔板放入帶有干燥劑的自封袋中,密閉自封袋,并將全部試劑放回2-8冰箱。

  3、開封后,按照建議的條件保存,校準(zhǔn)品、包被微孔板和HRP標(biāo)記抗體,有效期為14天,其他成分在標(biāo)簽標(biāo)明的有效期內(nèi)是穩(wěn)定的。

 

【適用儀器】

  半自動的酶標(biāo)儀,如Thermo MK3,或者國產(chǎn)酶標(biāo)儀。

 

【樣本要求】

  樣本類型和采集

以下只是列出樣品采集的一般指南。所有樣本采集過程中,不得使用疊氮鈉做為防腐劑。

1、細(xì)胞培養(yǎng)上清:4000rpm條件下離心20min,去除細(xì)胞顆粒和聚合物,上清液保存在- 20以下,避免反復(fù)凍融。

2、血清:使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管,操作過程中避免任何細(xì)胞刺激,4000rpm條件下離心20min,小心地分離出血清,保存在- 20以下,避免反復(fù)凍融。

3、血漿肝素,EDTA,或檸檬酸鈉作為抗凝劑。在4000rpm條件下,離心20分鐘取上清,血漿保存在-20以下,避免反復(fù)凍融。

 

樣本保存和穩(wěn)定性

樣本在2-8條件下,可以儲存72h,或者在- 20儲存6個(gè)月。樣本收集后,不是一次檢測完,請按一次用量分裝凍存,避免反復(fù)凍融,使用時(shí)在室溫下解凍,確保樣品均勻充分解凍。

 

【檢驗(yàn)方法】

試劑準(zhǔn)備

1、使用前,所有的組分都要至少復(fù)溫30min,確保充分復(fù)溫到室溫。

2、濃縮洗滌液:從冰箱取出的濃縮洗滌液,會有結(jié)晶產(chǎn)生,這屬于正常現(xiàn)象,水浴加熱使結(jié)晶*溶解。濃縮洗滌液與蒸餾水,按1:20稀釋,即1份的濃縮洗滌液,添加19份的蒸餾水。

 

 

 

 

 

操作程序

  1.   從室溫平衡20min后的鋁箔袋中取出所需板條,剩余板條用自封袋密封放回4。
  2.   設(shè)置陰性對照、陽性對照孔和樣本孔,陰性、陽新對照孔各加50μL對照品;
  3.   樣本孔待測樣本50μL;空白孔不加。
  4.   除空白孔外,標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔中每孔加入辣根過氧化物酶(HRP)標(biāo)記的檢測抗體100μL,用封板膜封住反應(yīng)孔,37水浴鍋或恒溫箱溫育60min。
  5.   棄去液體,吸水紙上拍干,每孔加滿洗滌液(350μL,靜置1min,甩去洗滌液,吸水紙上拍干,如此重復(fù)洗板5次(也可用洗板機(jī)洗板)。
  6.   每孔加入底物A、B各50μL,37避光孵育15min。
  7.   每孔加入終止液50μL,15min內(nèi),在450nm波長處測定各孔的OD值。

 

【檢驗(yàn)結(jié)果的解釋】

1. 陰性對照OD值:小于0.2。

2. 陽性對照OD值:大于0.8。

3. 陽性判斷(Cut-Off值):陰性對照OD值+0.25,樣本OD值大于閾值,判定為陽性,反之,為陰性。

【試驗(yàn)方法的局限性】

該試驗(yàn)僅作為定性檢測小鼠血清、血漿中小鼠抗人乙肝表面抗體,根據(jù)A值高低可作抗體水平強(qiáng)、中、弱的粗略評估。

【保存條件】

    2-8保存,有效期6個(gè)月。

【注意事項(xiàng)】

生物安全

1、檢測必須符合實(shí)驗(yàn)室管理規(guī)范的規(guī)定,嚴(yán)格防止交叉污染,所有樣品、洗棄液和各種廢棄物都應(yīng)按照傳染物進(jìn)行處置。

2、試劑盒的液體組分中,含有proclin-300防腐劑,可能引起皮膚過敏反應(yīng),避免吸入煙霧與皮膚接觸。

3、底物液對皮膚、眼睛和上呼吸道有刺激作用,避免吸入煙霧。戴上防護(hù)手套,實(shí)驗(yàn)完成后*洗手。

 

技術(shù)提示

1、混合蛋白溶液時(shí),避免起泡。

2、加校準(zhǔn)品與樣本時(shí),每個(gè)校準(zhǔn)品濃度和樣本都要更換移液槍頭,公共組分應(yīng)該懸臂加樣,避免交叉污染。

3、合適的溫育時(shí)間,和充分的洗滌步驟,是保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果準(zhǔn)確性的必要條件。

4、底物溶液為無色液體,保存過程中變?yōu)樗{(lán)色,代表底物溶液已經(jīng)失效,不得使用。

5、終止液加樣順序與底物溶液加樣順序一致,加入終止液后,藍(lán)色底物產(chǎn)物,會瞬間變?yōu)辄S色。

6、實(shí)驗(yàn)中,用剩的板條,應(yīng)立即放回自封袋中,密封(低溫干燥)保存。

7、所有液體組分,使用前充分搖勻,嚴(yán)格按照說明書標(biāo)明的時(shí)間、加樣量及加樣順序進(jìn)行溫育操作。

 

廢物處理

  所有使用或未使用的試劑,所有污染性的一次性材料,應(yīng)當(dāng)遵循傳染性或潛在傳染性產(chǎn)品的處理程序,每個(gè)實(shí)驗(yàn)室都有責(zé)任根據(jù)其實(shí)驗(yàn)的類型和危險(xiǎn)性級別,進(jìn)行廢物和污物的處理,同時(shí)要嚴(yán)格依照有關(guān)規(guī)定對待所有的廢物和污物。

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