小鼠抗人乙肝表面抗體（HBsAb） ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)操作

僅供科研使用，不得用于臨床檢驗(yàn)。

小鼠抗人乙肝表面抗體(HBsAb)定性檢測試劑盒（ELISA）

說明書

【產(chǎn)品名稱】

通用名稱：小鼠抗人乙肝表面抗體(HBsAb)定性檢測試劑盒（ELISA）

英文名稱：Mouse anti-hepatitis B virus surface antibody（HBsAb） ELISA KIT

【包裝規(guī)格】

96人份/盒

【預(yù)期用途】

僅供科研使用，定性檢測血清、血漿中小鼠抗人乙肝表面抗體(HBsAb)。

【檢驗(yàn)原理】

試劑盒采用雙抗體夾心法酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）。往預(yù)先包被人乙肝表面抗原（HBsAg）的包被微孔中，依次加入標(biāo)本、陰性和陽性對照、HRP標(biāo)記的檢測抗體，經(jīng)過溫育并*洗滌。用底物TMB顯色，TMB在過氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中的小鼠抗人乙肝表面抗體(HBsAb)呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm 波長下測定吸光度（OD 值），判定陰陽性。

【主要組成成分】

主要成分

需要但未提供的材料及耗材

  1、酶標(biāo)儀

2、精密移液器及一次性吸頭

3、蒸餾水

4、洗瓶或者自動洗板機(jī)

5、37℃水浴鍋或恒溫箱

6、500ml量筒

7、無粉一次性乳膠手套

【儲存條件及有效期】

  1、2-8℃保存，切勿冷凍，有效期6個(gè)月。

  2、開封使用后，包被微孔板放入帶有干燥劑的自封袋中，密閉自封袋，并將全部試劑放回2-8℃冰箱。

  3、開封后，按照建議的條件保存，校準(zhǔn)品、包被微孔板和HRP標(biāo)記抗體，有效期為14天，其他成分在標(biāo)簽標(biāo)明的有效期內(nèi)是穩(wěn)定的。

【適用儀器】

  半自動的酶標(biāo)儀，如Thermo MK3，或者國產(chǎn)酶標(biāo)儀。

【樣本要求】

  樣本類型和采集

以下只是列出樣品采集的一般指南。所有樣本采集過程中，不得使用疊氮鈉做為防腐劑。

1、細(xì)胞培養(yǎng)上清：4000rpm條件下離心20min，去除細(xì)胞顆粒和聚合物，上清液保存在- 20℃以下，避免反復(fù)凍融。

2、血清：使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管，操作過程中避免任何細(xì)胞刺激，4000rpm條件下離心20min，小心地分離出血清，保存在- 20℃以下，避免反復(fù)凍融。

3、血漿：肝素，EDTA，或檸檬酸鈉作為抗凝劑。在4000rpm條件下，離心20分鐘取上清，血漿保存在-20℃以下，避免反復(fù)凍融。

樣本保存和穩(wěn)定性

樣本在2-8℃條件下，可以儲存72h，或者在- 20℃儲存6個(gè)月。樣本收集后，不是一次檢測完，請按一次用量分裝凍存，避免反復(fù)凍融，使用時(shí)在室溫下解凍，確保樣品均勻充分解凍。

【檢驗(yàn)方法】

試劑準(zhǔn)備

1、使用前，所有的組分都要至少復(fù)溫30min，確保充分復(fù)溫到室溫。

2、濃縮洗滌液：從冰箱取出的濃縮洗滌液，會有結(jié)晶產(chǎn)生，這屬于正常現(xiàn)象，水浴加熱使結(jié)晶*溶解。濃縮洗滌液與蒸餾水，按1:20稀釋，即1份的濃縮洗滌液，添加19份的蒸餾水。

操作程序

1.   從室溫平衡20min后的鋁箔袋中取出所需板條，剩余板條用自封袋密封放回4℃。
2.   設(shè)置陰性對照孔、陽性對照孔和樣本孔，陰性、陽新對照孔各加50μL對照品；
3.   樣本孔中加入待測樣本50μL；空白孔不加。
4.   除空白孔外，標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔中每孔加入辣根過氧化物酶（HRP）標(biāo)記的檢測抗體100μL，用封板膜封住反應(yīng)孔，37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60min。
5.   棄去液體，吸水紙上拍干，每孔加滿洗滌液（350μL），靜置1min，甩去洗滌液，吸水紙上拍干，如此重復(fù)洗板5次（也可用洗板機(jī)洗板）。
6.   每孔加入底物A、B各50μL，37℃避光孵育15min。
7.   每孔加入終止液50μL，15min內(nèi)，在450nm波長處測定各孔的OD值。

【檢驗(yàn)結(jié)果的解釋】

1. 陰性對照OD值：小于0.2。

2. 陽性對照OD值：大于0.8。

3. 陽性判斷（Cut-Off值）：陰性對照OD值+0.25，樣本OD值大于閾值，判定為陽性，反之，為陰性。

【試驗(yàn)方法的局限性】

該試驗(yàn)僅作為定性檢測小鼠血清、血漿中小鼠抗人乙肝表面抗體，根據(jù)A值高低可作抗體水平強(qiáng)、中、弱的粗略評估。

【保存條件】

    2℃-8℃保存，有效期6個(gè)月。

【注意事項(xiàng)】

生物安全

1、檢測必須符合實(shí)驗(yàn)室管理規(guī)范的規(guī)定，嚴(yán)格防止交叉污染，所有樣品、洗棄液和各種廢棄物都應(yīng)按照傳染物進(jìn)行處置。

2、試劑盒的液體組分中，含有proclin-300防腐劑，可能引起皮膚過敏反應(yīng)，避免吸入煙霧與皮膚接觸。

3、底物液對皮膚、眼睛和上呼吸道有刺激作用，避免吸入煙霧。戴上防護(hù)手套，實(shí)驗(yàn)完成后*洗手。

技術(shù)提示

1、混合蛋白溶液時(shí)，避免起泡。

2、加校準(zhǔn)品與樣本時(shí)，每個(gè)校準(zhǔn)品濃度和樣本都要更換移液槍頭，公共組分應(yīng)該懸臂加樣，避免交叉污染。

3、合適的溫育時(shí)間，和充分的洗滌步驟，是保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果準(zhǔn)確性的必要條件。

4、底物溶液為無色液體，保存過程中變?yōu)樗{(lán)色，代表底物溶液已經(jīng)失效，不得使用。

5、終止液加樣順序與底物溶液加樣順序一致，加入終止液后，藍(lán)色底物產(chǎn)物，會瞬間變?yōu)辄S色。

6、實(shí)驗(yàn)中，用剩的板條，應(yīng)立即放回自封袋中，密封（低溫干燥）保存。

7、所有液體組分，使用前充分搖勻，嚴(yán)格按照說明書標(biāo)明的時(shí)間、加樣量及加樣順序進(jìn)行溫育操作。

廢物處理

  所有使用或未使用的試劑，所有污染性的一次性材料，應(yīng)當(dāng)遵循傳染性或潛在傳染性產(chǎn)品的處理程序，每個(gè)實(shí)驗(yàn)室都有責(zé)任根據(jù)其實(shí)驗(yàn)的類型和危險(xiǎn)性級別，進(jìn)行廢物和污物的處理，同時(shí)要嚴(yán)格依照有關(guān)規(guī)定對待所有的廢物和污物。